發(fā)布時(shí)間: 2018-08-06 點(diǎn)擊次數: 1002次
Fisher細胞爬片組織取材
1、腦組織和神經(jīng)組織應采用灌注固定后,再進(jìn)行后固定。
2、組織取材注意事項:
(1)標本新鮮:組織要求離體后30min~2h內浸入固定液,尤其是開(kāi)展分子生物學(xué)工作。動(dòng)物組織取材要求心臟還在跳動(dòng)時(shí)取材。
(2)注意防止人為因素的影響刀和剪要快,避免擠壓。
(3)組織塊的大小 厚為0.1~0.3cm,大小可根據需要而定。
Fisher細胞爬片的制作方法
1.爬片可用一般的蓋玻片,也可用爬片。
2.應用蓋玻片,可根據自己的需要剪裁成合適的大小,以備置于6孔板、12孔板或24孔板;裁剪時(shí)可用前護士輸液用于打開(kāi)玻璃安瓶的小沙輪,或者是口腔科的那種小沙輪,輕輕劃一下后,稍用力一掰就分開(kāi)了。如果接種大皿的話(huà),一般不將蓋玻片切開(kāi),直接清潔后放入培養皿中,到染色時(shí)再將之切開(kāi),這樣既保證了細胞均一性,又可同時(shí)做幾個(gè)指標的染色。
3.將剪裁好的爬片,置于濃硫酸中浸泡并過(guò)夜,第二天先用自來(lái)水沖洗20遍,再置于無(wú)水酒清中浸泡6小時(shí),再用三蒸水沖洗3遍,放在飯盒或者玻璃培養皿中烘干后進(jìn)行高壓消毒。
4.高壓后取出放入烤箱中烤干,備用??靖珊罂煞湃氤瑑襞_中。
5.關(guān)于多聚賴(lài)氨酸,很多人都將玻片用此處理,以使細胞與玻片結合更牢。但我在做爬片時(shí)從來(lái)沒(méi)用過(guò)多聚賴(lài)氨酸,細胞貼壁仍然很好,且在做后續的免疫細胞化學(xué)染色、tunel等凋亡檢測、免疫熒光等也從未脫過(guò)片。